2024年10月31日 星期四
百里香属植物ISSR-PCR和SRAP-PCR体系的确立及优化
Establishment and optimization of ISSR-PCR and SRAP-PCR reaction systems of Thymus L.
2008年 第17卷 第2期 页码[1-8]    下载全文[1.1MB]  
摘要

通过对PCR扩增体系中的模板DNA用量,Mg2+dNTPs和引物浓度的单因子实验,分别建立了适合百里香属(Thymus L.)植物总DNA的ISSR-PCR及SRAP-PCR优化反应体系。ISSR-PCR优化反应体系为:反应总体积20μL,含模板DNA 30 ng、Mg2+3.75 mmol·L-1、dNTPs 0.20 mmol·L-1、引物0.3 mmol·L-1TaqDNA聚合酶1 U。SRAP-PCR优化反应体系为:反应总体积20μL,含模板DNA 30 ng、Mg2+2.50 mmol·L-1、dNTPs 0.10 mmol·L-1、引物0.4 mmol·L-1和TaqDNA聚合酶1 U。运用优化的反应体系对百里香属植物地椒(T. quinque-costatus Celak.)、地椒的亚洲变种〔T. quinquecostatus var. asiaticus (K itagawa) C.Y.W u et Y.C.Huang〕和百里香(T. mongolicus Ronn.)15个居群的总DNA进行了ISSR和SRAP初步分析,获得了较好的扩增结果。

Abstract

Based on the single factor experiment of template DNA amount and concentrations of Mg2+, dNTPs and primerin PCR amplification system, the optimal reaction systems of  ISSR-PCR and SRAP-PCR of total DNA from Thymus L. species are established. The optimal reaction system of ISSR-PCR is asfollows: total volume 20μL, containing template DNA 30ng, Mg2+ 3.75mmol·L- 1, dNTPs0.20mmol·L- 1, primer 0.3mmol·L- 1and 1U Taq DNA polymerase enzyme. The optimal reaction system of SRAP-PCR is as follows: total volume 20μL,containing template DNA 30ng, Mg2+ 2.50mmol·L- 1, dNTPs 0.10mmol·L- 1, primer 0.4mmol·L- 1and 1U Taq DNA polymer rase enzyme. The two optimal systems are conducted in ISSR and SRAP marker analyses of total DNA from fifteen populations of Thymus quinquecostatus Celak., T. quinquecostatus var.asiaticus (Kitagawa)C. Y. Wuet . C. Huang and T. mongolicus Ronn., and the better amplification results are obtained.

关键词百里香属; ISSR-PCR; SRAP-PCR; 优化反应体系;
Key wordsThymus L.; ISSR-PCR; SRAP-PCR; optimal reaction system
作者权俊萍1,2,袁菊红2,3,穆红梅2,张明霞2,李乃伟2,夏 冰2
所在单位1.石河子大学农学院,新疆石河子832000;
2.江苏省•中国科学院植物研究所,江苏南京210014;
3.江西财经大学资源与环境管理学院,江西南昌330032
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基金项目国家自然科学基金资助项目(30370292); 江苏省自然科学基金资助项目(BK2004062); 江苏省道地药材种质资源库建设项目(BM2006104);